附录G （规范性附录）粪大肠菌群仪器快速检测法

G.1 原理

G.1.1 粪大肠菌群仪器快速检测法，基于粪大肠菌群能产生β-半乳糖苷酶，分解邻-硝基苯/酚-β-D-吡喃半乳糖苷（o-nitrophenyl-β-D-galactopyranoside，ONPG）使培养液呈黄色，通过光度检测及数据转换处理，得出单位体积（mL）或质量（g）粪便样品中含有的粪大肠菌群浓度值。

G.1.2 依单位体积（mL）或质量（g）粪便样品中含有的粪大肠菌群浓度值，换算成检出1CFU粪大肠菌的样品量，即粪大肠菌菌值。

G.2 设备与培养基

G.2.1 粪大肠菌群快速检测仪

G.2.1.1 仪器技术性能

仪器技术性能应符合下列要求：

a）进样体积：0.2mL～5mL；

b）测量范围：100 CFU/100 mL～1.0x1011 CFU/100 mL；

c）最低检出限：100 CFU/100mL；

d）培养温度：36.5℃±0.5℃或44.5℃±0.5℃；

e）检测周期：≤12h。

G.2.1.2 仪器电源

依现场实际情况分别可选择220V交流电源或12V直流电瓶电源。

G.2.1.3 粪大肠菌群快速检测仪应用培养基成分

粪大肠菌群快速检测仪应用培养基成分如下：

a）蛋白胨：10.0g；

b）氯化钠：5.0g；

c）邻硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷（ONPG）：0.15g；

d）N-2-羟乙基哌嗪-N-2-乙磺酸钠盐（HEPES钠盐）：25.0g（pH调至7.0±0.1）；

e）乳糖：5.0g；

f）酵母膏：5.0g；

g）氯化镁：0.3g；

h）蒸馏水：1000mL。

将上述a）～g）加入h）中溶解，调pH至7.0±0.1，混匀，分装至5mL带盖玻璃瓶中，115℃±1℃，灭菌20min。储存于4℃暗处备用。

G.2.1.4 生理盐水稀释液

生理盐水稀释液成分如下：

a）氯化钠：8.5g；

b）蒸馏水：1000mL。

将a）溶解于蒸馏水中，分装到锥形瓶内，121℃，20min灭菌备用。

G.2.1.5 0.03 mol/L磷酸盐稀释液

0.03 mol/L磷酸盐稀释液成分如下：

a）无水磷酸氢二钠：2.83g；

b）磷酸二氢钾：1.36g；

c）蒸馏水：1000mL。

将a）和b）溶解于少量蒸馏水中，待完全溶解后，加蒸馏水至1000mL，121℃，20min灭菌备用。

G.2.2 其他器材

5mL、1mL可调加样枪与灭菌枪头、灭菌采样瓶、冰箱。

G.3 操作步骤

G.3.1 开机预热30min，查看历史数据界面温度，确认温度使温度达到测量要求并稳定。

G.3.2 将样品混合均匀，用加样枪取0.2ml待检样品，加入到内含5mL养液的检测瓶中，混合均匀，记录编号并放入对应的检测槽中。

G.3.3 关团仪器培养区后，在主界面下按下“开始测试”键，进入测试界面，输入样本信息，按下“运行键，开始检测运行。

C.3.4 检测运行时间一股不超过12h，仪器将测试结果自动储存备香并打印至记录纸带上。

G.3.5 样品色度、浑浊度高时，可用生理盐水（8.5g/L）、0.03mol/L磷酸盐稀释液、脱氯灭菌自来水进行10倍稀释。

G.3.6 操作全过程应符合无菌操作要求。